胰蛋白酶切割胰岛素原生成胰岛素,在胰岛素的生产中发挥着重要作用,以猪源胰蛋白酶基因为模板,克隆扩增胰蛋白酶原(TgM)基因,可将其转化大肠杆菌,构建含TgM基因的工程菌株并诱导表达;菌液在经过高压均质机的破碎,收集破碎后的菌液,经过对其提纯后可得到胰蛋白酶原液,可用于后续酶活测定等试验。
此次实验研究菌体的破碎使用的是高压均质机,它可将工程菌株破碎率有效提升,获得较高浓度的蛋白溶液。
实验设备:高压均质机 GSL-5
高压均质机对大肠杆菌破碎处理的实验步骤:
1.准备高压均质机GSL-5(定制17ml处理量带在线排气)1台、标配款冷水机1台。
2.收集大肠杆菌样品进行仪器上机前处理。
3.清洗仪器,倒入处理后的大肠杆菌样品;压力调大800-1000bar处理3-4遍。
4.压力归零,收集均质后的样品。
大肠杆菌样品均质处理前后的实验效果图:
在实验获得高浓度的蛋白溶液后,可用紫外分光光度法检测酶活力,并将纯化获得的突变胰蛋白酶用于后续与胰岛素原相关实验。
高压均质机是一款利用高压泵将物料加压至一定压力后,通过均质阀的狭窄缝隙,使物料在高压下受到剪切、冲击和空穴效应等作用,从而达到均质、乳化和破碎等目的的设备,具有压力高、体积小、操作便捷、处理效率高等特点,广泛应用于制药、生物工程、食品、精细化工等领域。